Prática
ROTEIRO DA AULA PRÁTICA
NOÇÕES BÁSICAS DE MICROSCOPIA E PREPARO DE MATERIAL HISTOLÓGICO
Microscopia e técnicas histológicas
1. Introdução
A invenção do microscópio é atribuída a Hans Janssen e a seu filho Zac harias, dois holandeses fabricantes de óculos que viveram no século XVI. Eles descobriram que duas lentes, montadas apropriadamente em um tubo, tinham a capacidade de ampliar as imagens, permitindo aobservação de objetos pequenos, invisíveis a olho nu. Não há registro, porém, de que os Jonssen tenham usado seu aparelho com finalidades cientificas.
A descoberta da célula “A unidade microscópica que compõe os seres vivos” é creditada ao inglês Robert Hooke (1635-1703). Ele estudou finíssimas fatias de cortiça, tentando entender as propriedades de leveza e compressibilidade desse material.
Atualmente o microscópio é freqüentemente usado em experimentação por possibilitar uma melhor compreensão de alguns fenômenos biológicos, a partir da observação e análise de estruturas a nível celular.
Como as células são, na sua maioria, unidades invisíveis ao olho humano, se faz necessário para asua visualização o uso de instrumentos capazes de aumentar a imagem dos objetos. Um desses instrumentos é o microscópio. Atualmente são usados vários tipos de microscópio:óptico,eletrônico, varredura, fluorescência, etc.
O microscópio óptico
Este microscópio consiste em três sistemas de lentes: o condensador, a objetiva e a ocular. Ocondensador concentra a luz e projeta um feixe luminoso sobre o objeto em estudo. O uso adequado do condensador influencia a qualidade da imagem observada. A objetiva projeta uma imagem aumentada em direção a ocular. A ocular aumenta novamente a imagem e a projeta sobre a retina. O aumento da imagem é igual ao aumento da objetiva x ocular.
2. Procedimentos
I: Conhecer as partes de um microscópio (ver constituintes de um microscópio óptico).
II: Focar objeto 01 (letra em papel) em lâmina/lamínula através dos parafusos macrométrico e micrométrico , regulando condensador e diafragma.
III: Utilizando os procedimentos anteriores focar objeto 02 (linhas coloridas).
IV: Focar objeto 03 (lâminas permanentes).
3.Métodos de estudos histológicos
A: Microscopia óptica
Cortes -fino (2 a 10m)
- semifinos (0,5 a 1,5·m)
-resolução 0,2 a 0,6m
-Preparação para cortar o material:
1.Fixação: solução fixadora (ex. formaldeido)
2.Desidratação: série alcoólica de concentração crescente (ex. etanol)
3.Clareamento: tornar o material translúcido (ex. xilol)
4.Inclusão: meio de corte (ex. parafina, plástico, etc.)
- Corte: micrótomo
- Alternativa: congelamento do material e corte em criostato
- Preparação para coloração:
1.Retirar o meio de inclusão
2.Hidratação: série alcoólica de concentração decrescente
- Colorações: rotina
1. Hematoxilina-Eosina (H.E.)
Hematoxilina: corante básico- combina-se com componentes ácidos da célula (núcleo).
Eosina: corante ácido-combina-se com componentes alcalinos da célula (citoplasma).
-Desidratação: série alcoólica de concentração crescente
-Montagem: adesão da lamínla + preservação (ex. bálsamo do Canadá)